欢迎来到我们的腾飞珍禽斗鸡养殖场!联系我们|留言板
Banner
首页 > 新闻动态 > 内容
越南斗鸡新城疫病毒的分离与分子鉴定
- 2019-08-10 -

新城疫病毒(Newcastle disease virus ,NDV) 是禽I 型副黏病毒的成员,为单股负链RNA病毒基因组长度约15 kb ,编码6种结构蛋白,即NP、P、M、F、HN和L ,其中融合蛋白(Fusion p ro2tein ,F)位于病毒脂质囊膜上形成纤突,与病毒毒力的形成有关。NDV可引起多种禽鸟发生急性、败血性传染病。已从多种禽鸟,如鸭、鹅、鸡、鸽、麻雀、鹦鹉等体内分离到 NDV ,但从斗鸡体内分离到 NDV 却少见报道。本试验对从贵阳市某养殖场的进口越南斗鸡中分离到的 1 株斗鸡源 Ⅰ型副黏病毒(命名为 DQ) 的毒力、重要的 F 基因片段序列、病毒来源和基因型等进行了研究。

病毒分离 无菌取 3 只病死斗鸡的脑组织 ,用灭菌生理盐水研磨成乳悬液(1 ∶5 稀释) ,每毫升加入青、链霉素各 2 000 U 。37 ℃作用 30 min 后 , 3 000 r/ min离心20 min ,取上清液经尿囊腔接种 11日龄鸡胚 4 枚(0. 2 mL/ 胚) ,无菌收取尿囊液 ,并盲传 3 代 ,测定 HA 价 ,效价在 24 以上者判为阳性。- 20 ℃保存备用。

主要试剂及材料Trizol LS Regeant、Agar2ose Gel DNA Fragment Recovery Kit、AMV 反转录酶购自 Promega 公司 ;EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ限制性内切酶、Ex2Taq 酶、pMD182T 载体、RNA 酶抑制剂、IPT G、X2gal 均购自大连宝生物工程公司 ;抗NDV阳性血清、抗H5、H7、H9阳性血清、F48 E9 标准毒株均购自哈尔滨兽医研究所;9~10 日龄鸡胚、1日龄雏鸡均购自贵州大学科研种鸡场。 

引物设计根据 GenBank 收录的 NDV F 基因序列,参照文献[ 9210 ]的引物序列 ,用DNAStar软件设计1 对特异性引物,其序列为:N1 :5′2A T GGGCTCCA GA TCTTCTACCAGGA TC23′, N2 : 5′2TCACA TTTTTGTA GT GGCTCTCA TCT GA T23′。引物 N1 和 N2 可扩增出新城疫病毒的 F 基因的整个编码区 ,总 1 662 bp ,编码553个氨基酸 ,引物由上海生物工程公司合成。